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黑色素瘤相关抗原-A3在肺癌中的表达与临床意义的分析.pdf

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硕士学位论文血样抽取后30min内进行离心室温,2000RPM,10min,吸出上清,留取下层血细胞沉淀,储存于.80℃深低温冰箱备用。采用TⅪzol法提取外周血标本的总RNA,用酶标仪检测所提取总RNA浓度及质量,检测合格者采用反转录聚合酶链式反应reverse仃anscfipfionPCR,RTPCR方法反转录成eDNA,试剂盒均购自entas Life Sciences公司美国。采用实时聚合酶链式反应real time PCR方法的荧光染料法SYBRGreen检测外周血中MAGEA3的表达水平,选用Takara公司提供的SYBR Green试剂,上述实验严格按照试剂盒的使用说明书进行操作。2利用DNA重组技术将黑色素瘤相关抗原一A3MAGE.A3基因克隆到带GFP的慢病毒表达载体质粒PLV中,经限制性酶切和测序鉴定真核重组载体。将重组慢病毒载体PLVMAGE.A3.GFP与包装质粒pCMV.dR8.91及pCMV.VSV.G共转染人胚肾上皮细胞株293TAB,包装重组慢病毒LVMAGE.A3.GFP,并感染人肺癌细胞株A549,观察绿色荧光状态,并采用Westernblot法检测MAGE.A3蛋白的表达情况。3.客观疗效评价标准所有肺癌患者于第1及3周期化疗前行全身检查,按照RECIST 1.1实体瘤疗效评价标准,化疗疗效评估分为完全缓解complete response,CR、部分缓解partial response,PR、病灶稳定stable disease,SD和病灶进展progressive disease,PD。CR所有靶病灶消失;所有病理性淋巴结短径60岁、分期、分化程度中高分化和低分化、病理类型腺癌、鳞癌和小细胞癌、有无淋巴结转移、原发病灶部位左肺和右肺、有无远处转移、有无吸烟史分成两组,然后进行比较,外周血MAGE.A3的表达水平在年龄、组织学类型、分化程度、淋巴结转移及原发病灶部位等方面无明显差异。伴有远处转移的患者外周血中的MAGEA3的中位表达水平高于无远处转移的患者0.407,0.024,差异有统计学意义P0.115中位OS时间为6.500个月,差异有统计学意义P0.115PO.001。6.Recombinant eukaryotie lentivirus PLV-MAGEA3-GFP were successfullyconstructed.Green fluorescent state and Westem blot analysis revealed that theMAGE-A3 gene Can be correct transcripted and translated in A549 cell whichinfected by LVr-MAGEA3一GFE MAGE-A3 could be stablely expressed andpromote the proliferation ofA549 cell.Conclusion1.The overexpression of MAGEA3 in lung cancer patients indicates thatMAGE-A3 is related、析tll the occurrence of lung cancer.2.The overexpression of MAGE-A3 in NSCLC was closely related to the stageof tumor,distant metastasis,which indicated that MAGE-A3 plays an important rolein cell proliferation,invasion and matastssis in NSCLC.3.Detecting MAGEA3 Was helpful to the diagnosis of lung cancer.4.MAGEA3 Can probably serve as a pe却heml blood marker of monitonngtherapeutic efficacy of treatment and prognostic in patients with lung cancer.5.Wre successfully constructed the lentiviral recombinant eukaryotic expressionplasmid pLV-MAGEA3-GFP by recombinant DNA technology.And MAGE-A3gene Can be correct transeripted and translated in A549 cell which infected by pLV-MAGE..A3..GFESummaryW-e detected the expression of MAGEA3 in peripheral blood of patients witlllung cancer,benign lung diseases and healthy controls bY the of Real timePCR,to analyze the relationship between the expression ofⅣ【AGEA3 and clinicalpathological feature in lung cancer.And we assessed the predictive and prognosticui
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